EXHIBIT 99.1

Rapport d’essais de l’appareil de prétraitement des déchets VKIN 300 selon les préconisations de la norme NFX 30503-1

Laboratoire Hygiène Hospitalière

CHU Clermont-Ferrand

Mai-Juin 2025

Méthodes

Prélèvement par biocollecteur Sampl’air (AES Laboratoires) étalonné le 20/10/2024.

Volume prélevé par échantillon : 100 litres par impaction sur géloses Trypcase Soy Agar (TSA) (Biomérieux, réf 43011).

Conservation et transports des prélèvements à 4°C jusqu’à mise en incubation (délai < 24h)

Gélose TSA incubée 3 jours à 30°C et 2 jours à 25°C

Expression en unités formant colonies / m³, conversion en log₁₀.

Résultats

Absence de Staphylococcus spp, d’entérobactéries, de levures, de Pseudomonas spp et autres bacilles à Gram négatif non fermentaires

Méthodes 

Description des porte-germes

Porte-germe constitué de carré de compresses non-tissé (LCH ref 44564 Lot 4500005471)

Numération des suspensions bactériennes et fongiques

- Dilution des suspensions mères jusqu’à 10.-8 pour Bacillus et jusqu’à 10.-9 pour Aspergillus dans du bouillon tryptone sel

- Etalement de 100 µl des dilutions 10.-5 jusqu’à 10.-8 pour Bacillus sur gélose TSA

- Etalement de 100 µl des dilutions 10.-6 jusqu’à 10.-9 pour Aspergillus sur gélose Sabouraud (Thermo Scientific réf PO5096A)

- Incubation 48-72 h à 30°C

Dépôt des microorganismes sur les compresses porte-germes

- Bacillus : dépôt de 100 µl de la suspension bactérienne

- Aspergillus : dépôt de 10 µl de la suspension bactérienne

Ajout de sang de mouton comme substance interférente (Labmedical réf H04F-0817-P-0025) dans la suspension

Inoculation de la suspension par dépôt sur l’ensemble du porte-germe

Après traitement (indicateurs biologiques et courbe D)

Les compresses sont transférées dans des tubes Falcon stériles. On rajoute 3 ml (volume minimum pour que la gaze soit bien imprégnée) de bouillon Tryptone sel dans chaque tube. Vortexer 5 min.

Dilutions des suspensions 

- compresses tube transport : dilution jusqu’à 10-7

- compresses indicateurs biologiques et courbes D : dilution jusqu’à 10-4

- étalement de 100µl des dilutions sur gélose TSA (Sabouraud pour Aspergillus). Le reste de l’échantillon pur est ensemencé sur des boites de Petri supplémentaires de façon à analyser l’ensemble de l’échantillon.

- Incubation 48-72h à 30°C

Culture des cellules HeLa

Le milieu utilisé pour la croissance des cellules est HeLa est le milieu MEM préparé comme suit :

MEM (450 mL) + 10% SVF décomplémenté filtré à 0.22 µm (50 mL) + ATB2x (1mL)

Virus : Human Adenovirus 5 (ATCC VR-5 ^TM) Lot 70053996 Date de validation 26/09/2022

Modalités de culture du virus

Les cellules HeLa sont ensemencées en microplaques 96 puits (Falcon, ref 353072) 48 h avant l’infection.

Les porte-germes sont placés de façon aseptique dans un tube Falcon contenant 3 mL de milieu MEM.

Sonication pendant 1 min (Branson 2510) puis vortex pendant au moins 2 min

Dilution de série 10 en milieu MEM

Inoculation des microplaques avec l’échantillon pur et les dilutions (100 µL par puits, 8 puits par dilution). Le reste de l’échantillon pur est ensemencé sur des puits supplémentaires de façon à analyser l’ensemble de l’échantillon.

Incubation 2h à 37°C en agitation douce puis ajout de 100 µL de milieu MEM.

Incubation à 37° C sous 5% de CO₂

Lecture de l’effet cytopathogène à 2 et 3 jours post inoculation.

Détermination du titre viral selon la méthode de Spearman Kärber.

Références des produits utilisés pour les cultures cellulaires et virales :

MEM avec glutamine (réf Dutscher L0416 – 500)

PBS sans calcium ni magnésium (réf Dutscher L0615 – 500)

Trypsine avec rouge phénol sans calcium ni magnésium (réf Dutscher L0930 – 100)

Sérum de veau fœtal

Antibiotiques Pénicilline Streptomycine Néomycine (réf Sigma P4083)

Résultats

Méthodes 

Déchets avant traitement

- Peser 5 gr de DASRI

- Ajouter 45 ml de bouillon Tryptone sel (Dutscher réf 693424)

- Vortexer

- Laisser en contact à température ambiante pendant 1h en vortexant régulièrement

- Faire des dilutions jusqu’à 10-7 en bouillon tryptone sel

- Etaler 100 µl des dilutions 10.-4 jusqu’à 10.-7 sur des géloses TSA

- Incuber 48-72h à 30°C

- Numération de la flore bactérienne aérobie revivifiable et recherche de la présence de Staphylococcus spp, d’entérobactéries, de levures, de Pseudomonas spp et autres bacilles à Gram négatif non fermentaires

Déchets après traitement

- Peser 5 gr de DASRI

- Ajouter 45 ml de bouillon tryptone sel

- Laisser en contact à température ambiante pendant 1h en vortexant régulièrement

- Faire des dilutions de 10.-1 jusqu’à 10.-5 en bouillon tryptone sel

- Etaler 100 µl des 5 dilutions sur des géloses TSA

- Incuber 48-72 h à 30°C

- Numération de la flore bactérienne aérobie revivifiable et recherche de la présence de Staphylococcus spp, d’entérobactéries, de levures, de Pseudomonas spp et autres bacilles à Gram négatif non fermentaires

Résultats (7, 8 et 9 mai 2025)

NB : la formule du tableau B5 de l’annexe A de la norme est erronée sur la colonne D (poids du refus) : (C-A)/B est à remplacer par (C-A).

Conclusion :

Les tests réalisés conformément à la norme NFX 30503-1 par le laboratoire démontrent que l’appareil de prétraitement des déchets VKIN 300 répond aux spécifications de cette norme.

Pr O Traoré